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市場監管總局發布《畜肉中卡拉膠的測定》食品補充檢驗方法

日期:2018-07-02 人氣:733

中國質量新聞網訊  6月14日,國家市場監管總局官網發布公告稱,按照《食品補充檢驗方法工作規定》有關規定,《畜肉中卡拉膠的測定》食品補充檢驗方法已經國家市場監督管理總局批準,現予發布。

畜肉中卡拉膠的測定(BJS 201804)


附件

畜肉中卡拉膠的測定

(BJS201804)

1 范圍

本方法規定了生、鮮肉中卡拉膠的液相色譜-串聯質譜測定方法。

本方法適用于生鮮肉、冷卻肉、凍肉中卡拉膠的定量測定。

2 原理

樣品經勻漿后,用鹽酸溶液處理,其中的卡拉膠降解生成特征性寡糖,用液相色譜-串聯三重四極桿質譜檢測寡糖含量,外標法定量。

3 試劑和材料

本方法所用水為符合GB/T 6682規定的一級水。

3.1 試劑

3.1.1乙腈CH3CN):色譜純。

3.1.2甲酸銨HCOONH4:色譜純。

3.1.3鹽酸HCl):優級純。

3.2 試劑配制

10 mM甲酸銨水溶液:稱取甲酸銨(3.1.20.63 g,用水溶解并定容至1000 mL

3.3 標準品

卡拉膠:食品添加劑級。

3.4 標準儲備液的配制

稱取卡拉膠0.1 g(精確至0.1 mg),用60℃溫水溶解,轉移至10 mL容量瓶中,冷卻至室溫后,用水定容至刻度。此溶液濃度為10 mg/mL,現用現配。

4 儀器和設備

4.1 高效液相色譜-串聯質譜儀:配有電噴霧離子源(ESI源)。

4.2 分析天平:感量為0.0001g

4.3 分析天平:感量為0.01g

4.4 離心機轉速4 000 r/min

4.5 渦旋混合器

4.6 食品粉碎機

4.7 勻漿機。

4.8 恒溫水浴。

5 試樣制備和保存

依據 GB/T9695.19-2008規定的方法取樣。樣品剔除脂肪組織,瘦肉部分100 g用食品粉碎機(4.6)粉碎混勻。

混勻好的樣品分成兩份,分別作為試樣50 g和留樣50 g,裝入潔凈容器中,密封并標記,于 -18 ℃保存。

6 試樣處理

6.1基質加標工作液

稱取4打碎混勻的空白基質(確定不含卡拉膠的畜肉)各10 g(精確至0.01 g)于50 mL離心管中,分別加入標準儲備液(3.40.1 mL0.2 mL0.3 mL,0.4 mL,加入水使液體的總體積為23 mL,10000 rpm勻漿1 min,加入2 mL鹽酸(3.1.3),加蓋后渦旋30 s,置于80℃水浴中20 min,每10 min取出振搖一次。取出冷卻后,4000 rpm離心5 min,取上清液1 mL,用乙腈1:1稀釋后,過濾膜(0.22 mm,有機相),待測。

6.2 樣品待測液

稱取10 g試樣(精確至0.01 g)于50 mL離心管中,加入23 mL水,10000 rpm勻漿1 min,加入2 mL鹽酸(3.1.3),加蓋后渦旋30 s,置于80℃水浴中20min,每10 min取出振搖一次。取出冷卻后,4000 rpm離心5 min,取上清液1 mL,用乙腈1:1稀釋后,過濾膜(0.22 mm,有機相),待測。

7 測定

7.1參考液相色譜條件

7.1.1色譜柱:BEH Amide柱(粒徑1.8 μm2.1 mm ×50 mm),或性能相當者;

7.1.2 進樣量:5 μL

7.1.3 柱溫:30℃;

7.1.4 流速:0.3 mL/min

7.1.5流動相:A相:10 mM甲酸銨水溶液3.2);B相:乙腈(3.1.1)。梯度洗脫程序見表1。

 

1 梯度洗脫程序

時間/min

A/%

B/%

0.00

20

80

3.00

60

40

5.00

60

40

5.50

20

80

8.00

20

80

7.2參考質譜條件

7.2.1 離子化方式:電噴霧電離;

7.2.2掃描方式:負離子掃描;

7.2.3 檢測方式:多反應監測(MRM)。

霧化氣、鞘氣、碰撞氣均為高純氮氣或其他合適氣體,源內裂解電壓(fragmentorVoltage)、碰撞能量(CE)等參數使用前應調節,使質譜靈敏度達到檢測要求,參考條件詳見附錄A。

監測離子對信息參見附錄A中的表A.1和附錄C中的表C.1。

7.3定性測定

在相同實驗條件下測定基質加標工作液和樣品待測液,若樣品溶液中檢出色譜峰的保留時間與相應基質加標工作液色譜峰的保留時間一致,且樣品溶液的質譜離子對相對豐度與濃度相當基質加標工作液的質譜離子對相對豐度相比較,相對離子豐度(k)的相對偏差不超過表2規定的范圍,則可判定樣品中存在卡拉膠。

2 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

相對離子豐度(%

k>50%

50%k>20%

20%k>10%

k10%

允許的相對偏差(%

±20

±25

±30

±50

7.4定量測定

以基質加標工作溶液中含卡拉膠的質量為橫坐標,以定量離子的峰面積為縱坐標繪制標準工作曲線。按外標法計算得到待測樣品中卡拉膠的含量。

在上述色譜和質譜條件下,基質加標工作液的卡拉膠降解產物提取離子色譜圖見附錄中的圖B.1

7.5 空白試驗

除不加試樣外,均按樣品待測液(6.2)同法操作。

8 結果計算

結果按下式計算:

                                        

式中:

X — 試樣中卡拉膠的含量,單位為克每千克(g/kg);

m — 由基質加標工作曲線計算出的供試品溶液中卡拉膠的含量,單位為毫克(mg);

M — 試樣的質量,單位為克(g)。

以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,結果保留兩位有效數字。

9方法精密度

在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的15

10方法檢出限和定量限

本方法對卡拉膠檢出限0.02 g/kg;定量限為0.06 g/kg

11 方法準確度

本方法卡拉膠在0.10.4 g/kg添加濃度范圍內,回收率為80%~120%。

12 陽性結果的確證

檢測到的陽性結果,可使用高分辨質譜方法進行確證。

使用與串聯三重四極桿質譜法相同的色譜參數,進行一級質譜信息采集。可用于確證的離子列表見附錄C中的表C.2。

當質譜中出現2種或2種以上列表中的單電荷離子或雙電荷離子時,可確證陽性結果。

 

A           

附錄A

 

參考質譜條件

 

負離子模式掃描質譜條件

a)       離子源:電噴霧離子源(ESI源);

b)       檢測方式:多反應監測(MRM);

c)        毛細管電壓: -4000 VESI-);

d)       干燥氣溫度:200℃;

e)       干燥氣流量:5 L/min

f)        霧化氣壓力:30 psi;

g)       鞘氣溫度:280℃;

h)       鞘氣流量:8 L/min;

上述參考質譜條件僅供參考,當采用不同質譜儀器時,儀器參數可能存在差異,測定前應將質譜參數優化到最佳。

表A.1 卡拉膠降解產物的定性離子對、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量

序號

母離子

(m/z)

子離子

(m/z)

碎裂電壓

( V)

碰撞能量

(eV)

1

403

241*;97

200

30/35

2

483

403*;241

120

20/50

1、標*的為定量離子;2、以上兩對MRM均可使用,測定中可使用靈敏度較高者,本方法給出的檢出限、定量限、靈敏度等指標是基于以403為母離子的離子對數據。


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